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HEK-293T人胚腎細(xì)胞

HEK-293T人胚腎細(xì)胞

簡要描述:HEK-293T人胚腎細(xì)胞介紹:
種屬:人;懸浮生長;生長周期:3~4天
HEK-293T細(xì)胞是293T(293tsA1609neo)細(xì)胞系(ATCC CRL-11268)的衍生物。細(xì)胞持續(xù)表達(dá)SV40抗原,該細(xì)胞常用于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),轉(zhuǎn)染效率較高。(轉(zhuǎn)染一般以50%密度鋪板,待細(xì)胞剛剛貼到皿壁上后(一般8-10小時),即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作)。

產(chǎn)品型號: YKLHEK-293T

所屬分類:細(xì)胞庫

更新時間:2024-04-30

詳細(xì)說明:

HEK-293T人胚腎細(xì)胞介紹:

種屬:人;懸浮生長;生長周期:3~4天

HEK-293T細(xì)胞是293T(293tsA1609neo)細(xì)胞系(ATCC CRL-11268)的衍生物。細(xì)胞持續(xù)表達(dá)SV40抗原,該細(xì)胞常用于轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn),轉(zhuǎn)染效率較高。(轉(zhuǎn)染一般以50%密度鋪板,待細(xì)胞剛剛貼到皿壁上后(一般8-10小時),即可進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作)。

細(xì)胞形態(tài):上皮細(xì)胞樣

生長特性:貼壁生長

培 養(yǎng) 基:MEM培養(yǎng)基,90%;FBS,10%

生長條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%;溫度:37 ℃

傳代方法:1:2至1:6,每周2次

凍存條件:90%培養(yǎng)基+10% DMSO,液氮儲存

支原體檢測: 陰性

HEK-293T人胚腎細(xì)胞步驟:

1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm 皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時,可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為類:

1. 細(xì)胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗一遍后加入1ml YM,細(xì)胞變圓脫落后,加入1ml含血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4min 1000rpm離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為 10%,細(xì)胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 

 

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